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实验做不出?那是因为试剂盒没有选好!

发布时间:2019-08-01 阅读:103

试剂盒是测定外包公司针对一个测定指标,依次根据测定原理的专一性、测定结果的重复性和操作步骤的简易性,以及成本低廉性,选择和验证不同的测定方法,必要时重新设计新的测定方法,通过实践测定各种各样典型的生物样本,调整和优化测定体系与测定步骤,zui后标准化,形成试剂盒。

试剂盒选的好!实验难不倒!实验做不出?那是因为试剂盒没有选好!

首先让我们来说说分离试剂盒!该试剂盒用于悬浮或贴壁培养的细胞系。它能快速有效的将培养的细胞分成三个不同的组分(细胞质、细胞膜/细胞器、细胞核/细胞骨架)进而确定蛋白质的亚细胞定位。细胞组分分离对于研究许多蛋白质的定位、观察蛋白质的迁移和确定蛋白-蛋白络合物(如细胞支架有关的蛋白)有重要意义。

试剂盒中CIB缓冲液分离细胞质的蛋白,MIB缓冲液分离完整的膜和细胞器的蛋白,CyNIB缓冲液分离细胞核和细胞骨架的蛋白。试剂盒包含足够的缓冲液,能进行20次测定。

那么,分离到的各组分在用于SDS-PAGEWB分析其他指标之前,可先测定组分分离效率。这就用到了我们的检测试剂盒Cell Fractionation Antibody Sampler Kit #11843。其中#8727 MEK1/2(D1A5) Rabbit mAb用于检测细胞质的蛋白(Cyto),#5318AIF(D3902)XP® Rabbit mAb用于检测完整的膜和细胞器的蛋白(Mem),#4499Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb#5741 Vimentin(D21H3) XP®Rabbit mAb可分别用于检测细胞核和细胞骨架的蛋白(Nuc)。

全细胞裂解物(WCL)代表总蛋白质。该图显示细胞质的蛋白(Cyto),完整的膜和细胞器的蛋白(Mem)和细胞核和细胞骨架的蛋白(Nuc)分离干净且效率高。

下面,小编还给大家总结了实验中的注意事项哦!

1、除了添加和超声 CyNIB buffer 外,其他所有步骤都需要在冰上或 4℃ 操作。

2、该试剂盒可用于贴壁或悬浮的细胞。

3、、1X 蛋白酶抑制剂 (#5871) (500μl buffer 中加入5μl 100x 的蛋白酶抑制剂,试剂盒包含) 1 mM 新鲜的 PMSF (#8553) (500μl buffer 中加入25 μl 200 mM PMSF, 试剂盒不包含) 需现配现用。

4Buffer中已含磷酸酶抑制剂,无需额外添加。

5、步骤DE中所给体系,是根据10cm 培养皿中90%融合度的HeLa细胞(~5x106个细胞)得来的。

6、如果 CyNIB buffer 溶解后有絮状物,请在37℃水浴中孵育至完全溶解。

7、注意:保存各组分时需十分小心不要吸到沉淀,以免污染。

8、所有裂解液短期保存(1月内)需放 -20°C,长期保存(1月以上)则需放-80°C

如何选购试剂盒?

据了解,现在的市场中其产品的种属是非常齐全的,而且供应商众多,许多科研工作者们在购买所需产品时都不知道如何选择。那如何去选择产品,才能使实验结果得到保障呢?

其一,新的试剂盒,我们首先要查看其资质是否齐全,是否具有国家食品药品监督管理总局的相关批号,是否为合法有效试剂,是否有相关的临床试验验证等。

其二,针对试剂盒的出产来源,分为进口试剂盒和国产试剂盒。一般来说进口的要更有保障,但是随着海内科研实力的发展,国产质量已经迅速提高,性价比相对来说比较高。

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