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HCP检测试剂盒,解决宿主细胞蛋白残留检测难题

发布时间:2019-10-18 阅读:180

    细胞蛋白残留中,你遇到过哪些问题呢?HCP检测试剂盒,解决宿主细胞蛋白残留检测!

    什么是HCP?

    宿主细胞蛋白(host cellprotein, HCP) 是指生物制品中来自生产细胞系的宿主细胞的蛋白成分, 既包括宿主细胞的结构蛋白也包括宿主细胞(传代细胞)分泌的促生长因子等。
    HCP具有潜在的安全风险, 作为生物制品中的非目标成分,HCP可能引发机体未知的免疫应答而影响生物制品的功效,甚至引起超敏反应或其他不良反应。因此,建立合适的HCP检测方法,有助于生物制品的质量控制,提高生物制品的使用安全性。
    所有生物制剂的工艺开发的都必须经过HCP检测,并证明已在纯化过程中将它们降低到安全水平,一般要求每mg药物HCP应当控制在ng范围内。
    《中华人民共和国药典》2010年版第三部明确规定,CHO细胞残余蛋白占总蛋白含量要小于0.05%以下才符合规定;美国FDA规定,用一种灵敏度较高的方法检测药品中的HCP,其含量应该低于检测限(通常小于100ppm)。
    ELISA是目前应用最广泛的HCP检测方法,该方法操作相对简单、精度良好,方便设定控制范围和建立技术规范,中华人民共和国药典2010年版三部中的HCP检测均要求采用酶联免疫法(ELISA)测定。
    HCP ELISA的原理
    HCP ELISA的原理是先将HCP抗体包被酶标板,孵育待测样品,通过HCP抗体捕获和富集样品中HCP,再加入与包被酶标板的抗体种属不同的,酶联报告基团的HCP抗体,结合已被富集的HCP,通过底物显色或荧光的方式成像,最终定量计算HCP的含量。
    典型针对HCP的夹心ELISA实验
    在药物研发中,通常会建立通用和专属的HCP ELISA方法。前期可以采用通用HCP ELISA试剂盒。到临床实验时,药企会采用专属试剂盒,即工艺特异HCP ELISA试剂盒,需要单独纯化HCP蛋白,免疫筛选抗体。
    为什么要定制HCP检测试剂盒?
    目前生物制品行业多以商业化的通用型HCP ELISA试剂盒来检测产品中的宿主蛋白残留。但宿主细胞的分泌型蛋白和部分死亡细胞释放的结构蛋白成分复杂,不同的工艺,加上相关基因产物需要经过独特的翻译后修饰,这些都导致不同生物制品中HCP的成分和比例有较大差异。使用通用型的HCP ELISA试剂盒,通常会缺乏特异性的评估,会带来漏检和检测结果批间差过大的风险,从而对生物制品质量安全带来风险。
    只有根据不同的生产工艺,制备工艺特异的细胞蛋白标准品和特异的抗血清,建立相应的检测方法,才能更真实反应供试品的细胞蛋白残留量。
    建立特异性HCP检测方法费时且研发成本较高,但是研发成功后,可以获得长期安全有效的保障;如果从大量使用角度考虑,成本也远低于商业化的通用型ELISA试剂盒。
    特别是对于药企来说,药物研发周期很长,成功率也很低,投入和产出不是直接划等号的,在药品研发的中后期,药企也会非常关注生产工艺设计过程中HCP的控制。因为,药物中HCP残留量会影响临床试验效果。
    HCP检测试剂盒制备流程
    空载体转化宿主细胞,培养空载细胞系;
    按正常生产流程纯化空载细胞系培养物,可以省去最后几个步骤,以便尽可能保留HCP成分;
    用HCP免疫合适的动物宿主,例如兔,山羊,绵羊或鸡,通过级联免疫(Cascade Immunization),大大提高抗体对微量蛋白质检测的敏感性;
    提取宿主产生的抗体,通过2D凝胶电泳/ Western印迹检查抗原的覆盖率;
    筛选最佳抗体及抗体组合;
    配制夹心ELISA试剂盒。





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